1、开机
打开仪器背面电源开关,仪器显示开机画面,按画面提示操作,进行检测之前先校正仪器零点。
2、试剂配制
2.1、缓冲液:取1包缓冲剂加入500mL蒸馏水或纯净水中,搅拌溶解制成磷酸缓冲液(pH7.6), 常温保存。
2.2、显色剂:取1瓶显色剂加25mL缓冲液溶解,使用时取100μL,4℃冰箱保存。
2.3、底 物:取1瓶底物加12.5mL蒸馏水或纯净水溶解,使用时取100μL,4℃冰箱保存;或取1瓶底物加2.5mL蒸馏水或纯净水溶解 ,使用时取20μL,4℃冰箱保存。
2.4、 胆碱酯酶:酶制剂无需配制,可直接取用,使用时取100μL,4℃冰箱保存。
3、样品提取
取2g果蔬样品(块茎类取4g),叶菜剪成25px左右见方的碎片,块茎类取横截面样品或取其表皮,放入三角瓶中,加入10mL缓冲液,振荡1~2min ,倒出提取液,静置2min,待测。若提取液混浊或杂质太多可过滤后再测。
4、测试
4.1、 对照测试:于反应瓶中加入2.5mL缓冲液,再分别加入100μL酶液和显色剂,混匀,静置反应10min后加入100μL(或20μL)底物,摇匀并立即倒入比色杯中,及时放入仪器的测量室通道中。按<对照>键,显示屏延迟设定秒数后,测量时间开始,计时完毕,显示屏显示对照吸光度增量(ΔΑ),并提示完成。在进行对照测试时,其他通道可同时进行样品测试。
4.2、样品测试:于反应瓶中加入2.5mL待测液,再分别加入100μL酶液和显色剂,混匀,静置反应10min后加入100μL(或20μL)底物,摇匀并立即倒入比色皿中,及时放入仪器的测量室通道。按<样品>键,显示屏下方延迟设定秒数后,测量时间开始,计时完毕,显示屏显示样品吸光度增量(ΔΑ)及抑制率,并提示合格或超标。数据可进行自动保存,如有需要按<打印>键打印。