食品大肠菌群检验纸片
1、原理及适用范围
将乳糖胆盐选择性培养基和TTC显色剂加载在纸片上,经培养后能够在纸片上生长并发酵乳糖产酸的即为大肠菌群阳性,记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数,根据大肠菌群MPN表查出相应的大肠菌群数。 食品大肠菌群检验纸片法与国标法中的九管法相对应,将原来几步的试验简化为一步,时间由78h缩短为24h以内,省去了制备培养基、消毒和培养器皿的清洗处理等大量辅助性工作,随时可以打开包装进行抽样检测。 执行标准:食品安全国家标准 食品微生物检验大肠菌群计数MPN计数法(GB/T 4789.3--2010)。
适用于各类食品、饮料等样品中大肠菌群的快速测定。
2、操作方法
2.1、样品处理:
按无菌操作称取样品25g(或25mL)放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液(或生理盐水)的取样瓶或均质杯中,经充分振摇做成1:10的样品匀液。样品匀液的pH值应在6.5~7.5之间,必要时用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸调节。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液,注入含有9mL稀释液的试管内,振摇试管制成1:100的样品匀液。根据对样品污染状况的估计,按上述操作,一次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次,换一支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过15min。
2.2、接种
2.2.1、选取两个稀释度进行接种,普通食品一般采用1:10和1:100这两个稀释度,饮料采用原液和1:10两个稀释度。本品每份由三片大纸片(接10mL,袋中二片叠放算作一大片),六片小纸片(接1mL)组成。
2.2.2、用灭菌吸管吸取10mL 1:10样品匀液加到含有大纸片的塑料袋中(相当于接样品1g),吸透后平放,做三个重复。再用1mL灭菌吸管吸取1mL同一稀释度的样品匀液加到含有小纸片的塑料袋中(相当于接样品0.1g),做三个重复。再另取一支1mL灭菌吸管吸取1mL 1:100样品匀液加到含有小纸片的塑料袋中(相当于接样品0.01g),做三个重复。
2.3、培养:
将接种好的纸片(可叠放)放入36℃±1℃培养箱中培养15~24h。
3、大肠菌群可能数(MPN)的报告
3.1 若纸片变黄或在黄色背景上呈现红色斑点为大肠菌群阳性纸片。纸片保持紫蓝色不变或在紫蓝色背景上呈现红色斑点,但周围没有黄色均为大肠菌群阴性纸片。
3.2 记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数,根据《食品饮料大肠菌群MPN表》查出相应的大肠菌群数。
3.3 如接种的第一个梯度为原液,应将表上查出的结果除以10。
4、食品大肠菌群检验纸片注意事项
新的国家标准所用的单位改为每克(或毫升)检样中大肠菌群可能数,标准的接种量为0.333g(mL),MPN表也是由此而设计。而使用本品的标准接种量为3.33g(mL),大纸片接种10mL 1:10样品匀液相当于1g样品,因而表内数字应相应降低10倍。饮料样品的接种量为33.3mL,大纸片接种10mL样品原液,表内数字应降低100倍。
5、保存条件
本产品需存放在4℃~10℃冰箱中,保质期为一年,铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好,放到冰箱中,一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水,建议在拆封前将整包回温至室温。
食品、饮料大肠菌群(MPN)检索表
阳性纸片数 | MPN | 95%可信限 | 阳性纸片数 | MPN | 95%可信限 | ||||||
0.10 | 0.01 | 0.001 | 下限 | 上限 | 0.10 | 0.01 | 0.001 | 下限 | 上限 | ||
0 0 0 0 | 0 0 1 1 | 0 1 0 1 | <3.0 3.0 3.0 6.1 | - 0.15 0.15 1.2 | 9.5 9.6 11 18 | 2 2 2 2 | 2 2 2 3 | 0 1 2 0 | 21 28 35 29 | 4.5 8.7 8.7 8.7 | 42 94 94 94 |
0 0 1 1 | 2 3 0 0 | 0 0 0 1 | 6.2 9.4 3.6 7.2 | 1.2 3.6 0.17 1.3 | 18 38 18 18 | 2 3 3 3 | 3 0 0 0 | 1 0 1 2 | 36 23 38 64 | 8.7 4.6 8.7 17 | 94 94 110 180 |
1 1 1 1 | 0 1 1 2 | 2 0 1 0 | 11 7.4 11 11 | 3.6 1.3 3.6 3.6 | 38 20 38 42 | 3 3 3 3 | 1 1 1 1 | 0 1 2 3 | 43 75 120 160 | 9 17 37 40 | 180 200 420 420 |
1 1 2 2 | 2 3 0 0 | 1 0 0 1 | 15 16 9.2 14 | 4.5 4.5 1.4 3.6 | 42 42 38 42 | 3 3 3 3 | 2 2 2 2 | 0 1 2 3 | 93 150 210 290 | 18 37 40 90 | 420 420 430 1000 |
2 2 2 2 | 0 1 1 1 | 2 0 1 2 | 20 15 20 27 | 4.5 3.7 4.5 8.7 | 42 42 42 94 | 3 3 3 3 | 3 3 3 3 | 0 1 2 3 | 240 460 1100 <1100 | 42 90 180 420 | 1000 2000 4100 - |
注1:本表采用3个稀释度〔0.1g(或0.1ml)、0.01g(或0.01ml)、和0.001g(或0.001ml)〕,每个稀释度接种3片。 注2:表内所列检样量如改用1g(或1ml)、0.1g(或0.1ml)、和0.01g(或0.01ml)时,表内数字应相应降低10倍;如改用0.01g(或0.01ml)、0.001g(或0.001ml)、和0.0001g(或0.0001ml)时,则表内数字应相应增高10倍,其余类 |
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